Resultados comparativos de la producción in vitro de embriones bovinos mediante dos protocolos de superestimulación con FSH antes de la OPU(1)
Carlos Munar, Graciela Aizaga, Ricardo Añón, Hugo Colombo, Pablo Lafarga
Munar y Asociados S.A., La Plata, Argentina. cmunar@munar.com.ar
El objetivo de este estudio fue comparar los efectos de la superestimulación (SS) con FSH (PLUSET, Calier, España) antes de la OPU utilizando dos protocolos, FSHx5 y FSHx1, para simplificar su aplicación en un gran número de donantes. La SS induce el crecimiento folicular y la maduración ovocitaria, sincronizando la madurez citoplasmática con el arresto nuclear antes de la OPU. Posteriormente, 22 h de MIV completan la capacitación ovocitaria, aumentan la tasa de blastocistos y previenen malformaciones epigenéticas. Se realizaron servicios de MOET y OPU-IVP en 13 granjas, indicando OPU-IVP a donantes de Bos taurus que no produjeron embriones con MOET, utilizando ambos sistemas ajustados a la historia clínica de cada donante y a la disponibilidad de las receptoras para transferir embriones frescos de PIV. Se utilizaron dos protocolos de SS, en ambos la onda folicular se sincronizó con una inyección de 20 µg (IM) del análogo de GnRH Acetato de Buserelina (Veterelin, Calier), y 36 h después se inyectó FSH - PLUSET (IM) en solución salina, 250 UI en vaquillonas y 325 UI en vacas. El protocolo FSHx5 se administró en cinco inyecciones cada 12 h, a dosis constante y con un período de 24-30 h de descanso hasta la OPU. El protocolo FSHx1 administró la dosis total en una inyección y con un período de 48-54 h de descanso hasta la OPU. Las OPU se realizaron utilizando equipo WTA y medios de cultivo de elaboración propia. Los ovocitos se manipularon en laboratorios móviles y se transportaron en medio IVM durante 22 h al laboratorio central. La FIV del día 0 se realizó con semen centrifugado en PureSperm, con 1 MM/mL de espermatozoides móviles, durante 18-21 h. Los cigotos se despojaron del cumulus mediante pipeteo y se cultivaron en SOF1. El día 3, se evaluó el clivaje (segmentación) y la pasaron a la primera alimentación en SOF2 con glucosa. El día 5 se realizó la segunda alimentación en SOF3 con glucosa y forskolina. Los días 6 y 7, los blastocistos se congelaron o se transfirieron en fresco. En 2024, se añadió L-carnitina al medio IVM y SOF junto con forskolina como moderador del metabolismo de los ácidos grasos. De 2021 a 2023, se realizaron 377 OPU con FSHx5, y en 2024, 230 OPU con FSHx1. No hubo diferencias entre los protocolos SS con 81% de tamaño folicular de 6 a 14 mm, 55% de tasa de recuperación de ovocitos/folículos aspirados y calidad ovocitaria (83% G1 y G2). Se observó un tamaño folicular ligeramente menor con FSHx1 porque el efecto de la FSH dura 48 h, en lugar de 72 h con FSHx5 hasta la OPU. Se produjeron un total de 1699 y 1003 embriones respectivamente, con 4,5 vs 4,4 por OPU, 48% vs 50% de blastocistos/cigotos y 41% vs 48% de tasa de preñez con ET fresco confirmada a los 90 días de gestación. Simultáneamente, se transfirieron con MOET logrando tasas de preñez de 62% y 55% con embriones frescos y congelados respectivamente. La SS con FSH no modificó la población folicular y no mejoró la supervivencia a la descongelación utilizando los procedimientos DT convencionales, sin pre-deshidratación y con 5 minutos de equilibración en etilienglicol. Además, la SS con cualquiera de los protocolos de FSH mejoró la calidad de los ovocitos y duplicó la producción de embriones en comparación con la PIV sin tratamiento con FSH, reduciendo las OPU sin embriones al 14%, con una tasa de aborto del 8%, como en la MOET, normalizando el peso al nacer con menos del 10% de distocia y el nacimiento de un 48% de terneras. Además, la inyección única de FSHx1 simplificó el tiempo de trabajo, permitiendo la SS de donantes de PIV a gran escala, mejorando el bienestar animal y del personal responsable de los partos.
Informaci贸n preparada por la C谩mara Argentina de Biotecnolog铆a de la Reproducci贸n e Inseminaci贸n Artificial (CABIA)....
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